Цифровой эталон для подсчёта ДНК

В обычной количественной ПЦР (кПЦР) измеряют, как меняется количество ДНК в целом образце в течение определённого времени (A). Поэтому такую ПЦР называют ещё ПЦР в реальном времени, или ПЦР-РВ (или rt-PCR, real time PCR). Уровень ДНК оценивают до того, как закончилась реакция, и оценивают несколько раз; чем больше ДНК было изначально, тем круче повышается её уровень. Крутизну изменений в количестве ДНК сравнивают с калибровочным образцом и тем самым делают вывод, сколько копий ДНК было в образце изначально. В цифровой ПЦР образец разбивают на тысячи капель объёмом порядка нанолитра и после этого в каждой капле запускают ПЦР (B). Реакцию доводят до конца, после чего смотрят, в каких каплях она прошла (положительные капли), а в каких — нет (отрицательные капли). Положительные и отрицательные капли можно уподобить нулям и единицам цифрового кода, поэтому ПЦР и называется цифровой (или капельно-цифровой — ddPCR, droplet digital PCR). Соотношение капель-«нулей» и капель-«единиц» анализируют с помощью распределения Пуассона, которое и даёт количество копий ДНК в исходном образце. Рисунок из статьи: Lodrini M., Sprussel A., Astrahantseff K. et al.//Oncotarget. 2017; 8:85234 – 85251/CC BY 3.0 (с изменениями).